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產(chǎn)品展示
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miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

  • 型   號:71501
  • 價   格:
  • 更新時間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix(莖環(huán)法)是專門為莖環(huán)法miRNA定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR檢測試劑,其中的DNA polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式, 配合特殊的Buffer 體系,使反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

2x miRNAUniversal SYBR qPCR Mix (莖環(huán)法)

 

miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量 

目錄號:71501

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

71501-500

500 rxns(20 μl/rxn)

71501-2500

2500 rxns(20 μl/rxn)

2x miRNA Universal SYBRqPCR Mix

1 ml x5

1 ml x25

保存條件

-20℃保存,有效期 24 個月。

使用前,充分融解,輕輕顛倒混勻,短期使用可放在 4 ℃,避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡介

2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix(莖環(huán)法)是專門為莖環(huán)法miRNA定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR檢測試劑,其中的DNA polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式,配合特殊的Buffer體系,使反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

預(yù)混液中含有通用型ROX,適用于所有qPCR儀,使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器。

需要自備的試劑:

待檢測miRNA對應(yīng)的qPCR的引物

Realtime 上游引物設(shè)計:

miRNA序列除去3’端6個堿基 的剩余部分作為上游引物,如miR-1的上游引物為(注意 把U改為T):TGGAATGTAAAGAAGT.檢查引物的Tm 值(一般參考DNAMAN),如果Tm值較低,則在5’端加GC使Tm值接近60度。因此miR-1的上游引物可設(shè)計 為:GCGCTGGAATGTAAAGAAGT,61.4度。

下游引物是通用的,序列為GTGCAGGGTCCGAGGT。

引物設(shè)計好后,需要通過預(yù)試驗(yàn)檢測引物的特異性。一般需要做溶解曲線來檢測引物的特異性;同時最好將PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測產(chǎn)物是否單一(產(chǎn)物長度很短,需要3%以上的瓊脂糖膠)

操作步驟:

1. 在室溫融化2x miRNA qPCR Mix、primer(10μM)、DNA模板、ddH2O,并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系:(以20μl反應(yīng)體系為例)

Components

Volume (20μl)

Final Concentration

2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix

10 μl

DNA Template

Variable

As required

Forward Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

ddH2O

Up to 20 μl

Not applicable

1) 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系,cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%。

2) 對于特殊的檢測體系中,高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,根據(jù)所檢測miRNA的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(10倍或者100倍)。

3) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果,反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。

擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

 

3. qPCR反應(yīng)程序

注意:

1) 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng),絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說,二步法擴(kuò)增特異性高,三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度;如果因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時,可嘗試加長延伸時間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。

2) 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;

3) 延伸(退火&延伸)時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。

4) 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。

miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量 

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